バイオ・ラッド ラボラトリーズ

フローサイトメトリー用抗体

多色フローサイトメトリー実験用の抗体、キット、試薬

フローサイトメトリーは、流体が1つまたは複数のレーザーを通過する際に、流体内の細胞を測定して特徴付けるために使用される科学的な方法です。

フローサイトメトリーでは、特定のレーザーによる励起で異なる波長の光を発する蛍光色素に結合した抗体を使用して、細胞を蛍光標識します。フローサイトメトリーについての基本的な紹介については、「フローサイトメトリー基礎ガイド」をご覧ください。

フローサイトメトリー実験で測定される一般的な特性は、細胞サイズ、相対的な粒度、相対的な蛍光です。 実行される標準的な手順は、細胞カウント、細胞分類、バイオマーカー検出およびタンパク質工学です。 診断では、フローサイトメトリーを使用して、さまざまな白血病やリンパ腫のタイプなど、良性と悪性の造血障害を検出および区別します。

フローサイトメトリー用抗体

• New! StarBright抗体（フローサイトメトリー用）
• フローサイトメトリー抗体
  • Dual color reagents
  • Triple color reagents
  • Four color reagents
  • Lineage Coktail
• アイソタイプコントロール
• No Compensationパネル

フローサイトメトリー用試薬

• 前処理用試薬
• キャリブレーション試薬

フローサイトメトリーで使用できるキット

• 細胞生存率アッセイ
• 細胞増殖アッセイ
• アポトーシスアッセイ
• オートファジーアッセイ
• 抗体標識キット

フローサイトメトリー用ツール

• Fluorescent Spectraviewer
• Multicolor Panel Builder
• フローサイトメトリー基礎ガイド
• Interactive Immune Cell Marker

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フローサイトメトリー抗体 (Flow Cytometry Tested Antibodies)

一般的な白血球サブセットのマーカー発現

このマーカーの組み合わせにより、ヒト末梢血中のT細胞、B細胞、単球、顆粒球の同定が可能になります。 以下の表の抗体を使用して、さまざまなヒト白血球集団が同定されました。 描かれたゲーティング戦略は、単球および顆粒球、B細胞およびヘルパーTおよび細胞障害性T細胞 の同定を可能にします。

Ordering Information

カタログ番号	マーカー	蛍光標識
MCA1477PB	CD3	Pacific Blue
MCA1267A647	CD4	Alexa Fluor 647
MCA1226PE	CD8	RPE
MCA1940A700	CD19	Alexa Fluor 700
MCA1710C	CD20	PE-Cy5
MCA1568P750	CD14	PE-Alexa Fluor 750
MCA216F	CD66b	FITC

種ごとにフローサイトメトリー抗体検索のリンクを用意しています。 Human,Mouse,Ratご希望のリンクをクリックして日本語抗体検索サイトで抗原名を入力すれば絞り込み検索が可能です。

フロー用抗体 Human      フロー用抗体 Mouse      フロー用抗体 Rat      

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No Compensation パネル

使用するコンペンセーション量とそれをいつ実行するかを知ることは、フローサイトメトリーでは困難な場合があります。バイオ・ラッドの4色免疫表現型パネルはこれらの課題を克服します。 以下のパネルは、ヒトおよびマウスの血液および組織の一般的な表面マーカーが含まれており、ほとんどコンペンセーションを必要とせずに、T細胞、B細胞、NKおよび骨髄集団などの多くの集団を識別できるようにします。

コンペンセーション（Compensation）

マルチカラーフローサイトメトリーをする場合、蛍光色素間でスペクトルが重複するリスクがあります。 たとえば、FITCは525 nmで最大の発光を示しますが、実際には他のフィルターを通過して意図したPMT（光電子増倍管;検出器）以外で検出されるより長い波長の光子を放出します。 これは、スペクトルオーバーラップと呼ばれます。 したがって、488 nmレーザーを使用して、FITC（525/35のフィルターを備えた）とPE（PMTの前に585/40のフィルターを備えた）をパネルで組み合わせる場合、両方のFITCとPEの蛍光体の相対的な寄与をFITCおよびPE検出器で決定して削除する必要があります。 この手順はコンペンセーションと呼ばれ（下図）、パネルで使用しているすべての蛍光色素に対して行う必要があります。

蛍光コンペンセーション
FITCとPEの発光スペクトルは、これらの蛍光色素を検出するために一般的に使用されている525/50および585/40の2つのフィルターのグラフで表示されます。 赤で示されているのは、PE検出器で検出されるFITCの部分であり、コンペンセーションを使用してPE信号から減算する必要があります。

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フローサイトメトリー　基礎ガイド

製品特長

• コンペンセーション作業が軽減される４色の蛍光色素からなる抗体パネル
• ヒトもしくはマウス用の免疫細胞集団解析用

ヒト No Compensation パネル：T細胞識別パネル

ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞パネル

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA87PB	CD45	Pacific Blue
MCA1226F	CD8	FITC
MCA463P750	CD3	RPE-Alexa750
MCA1568A647	CD14	Alexa647

活性型T細胞パネル①

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA1267PB	CD4	Pacific Blue
MCA71F	HLA-DR	FITC
MCA1019P750	CD38	RPE-Alexa750
MCA463A647	CD3	Alexa647

活性型T細胞パネル②

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA1226PB	CD8	Pacific Blue
MCA71F	HLA-DR	FITC
MCA1019P750	CD38	RPE-Alexa750
MCA463A647	CD3	Alexa647

制御性T細胞 (Treg)パネル

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA1267PB	CD4	Pacific Blue
MCA2127F	CD25	FITC
MCA463P750	CD3	RPE-Alexa750
HCA145A647	CD127	Alexa647

膜透過未処理で制御性T細胞(CD3+, CD4+, CD127lo, CD25hi)をゲーティングした。

メモリーT細胞、 ナイーブT細胞パネル①

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA88PB	CD45RA	Pacific Blue
MCA461F	CD45RO	FITC
MCA463P750	CD3	RPE-Alexa750
MCA1267A647	CD4	Alexa647

メモリーT細胞、 ナイーブT細胞パネル②

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA88PB	CD45RA	Pacific Blue
MCA461F	CD45RO	FITC
MCA463P750	CD3	RPE-Alexa750
MCA1226A647	CD8	Alexa647

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ヒト No Compensation パネル：NK細胞、NKT細胞識別パネル

NK細胞パネル①

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA87PB	CD45	Pacific Blue
MCA463F	CD3	FITC
MCA1940P750	CD19	RPE-Alexa750
MCA2537A647	CD16	Alexa647

NK細胞パネル②

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA87PB	CD45	Pacific Blue
MCA463F	CD3	FITC
MCA1940P750	CD19	RPE-Alexa750
MCA2693A647	CD56	Alexa647

NK細胞パネル③

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA87PB	CD45	Pacific Blue
MCA4646F	CD335	FITC
MCA463P750	CD3	RPE-Alexa750
MCA2693A647	CD56	Alexa647

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マウス No Compensation パネル：リンパ球識別パネル

ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞パネル

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA500PB	CD3	Pacific Blue
MCA1031F	CD45	FITC
MCA609P750	CD8	RPE-Alexa750
MCA4635A647	CD4	Alexa647

細胞集団（CD45+CD3+）から CD4+ヘルパーT細胞とCD8＋ 細胞傷害性T細胞にゲーティングした。データはZE5 Cell Analyzerで取得した。

活性型T細胞パネル①

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA500PB	CD3	Pacific Blue
MCA1580FT	CD69	FITC
MCA1258P750	CD45R	RPE-Alexa750
MCA4635A647	CD4	Alexa647

活性型T細胞パネル②

単品カタログ番号	抗原名	標識
MCA500PB	CD3	Pacific Blue
MCA1580FT	CD69	FITC
MCA1258P750	CD45R	RPE-Alexa750
MCA609A647	CD8	Alexa647

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細胞存在比率

フローサイトメトリー測定において、予め細胞存在比率を知ることは、十分な細胞集団のデータを取得するために重要です。ヒト、マウスの組織別参照表は染色時の蛍光色素の選択およびセルソーティングの最適化に役立ちます。

ヒト末梢血の細胞存在比率

白血球		リンパ球		ミエロイド細胞
細胞タイプ	％	細胞タイプ	％	細胞タイプ	％
T細胞	10-25	CD4+	10-20	好中球	40-65
B細胞	3-10	CD8+	3-10	好酸球	0.1-2
顆粒球	45-65	Tregs	0.2-1.4	好塩基球	0.1-2
単球	3-10	γδ T細胞	1-5	樹状細胞	0.5-1
NK細胞	2-5	ナイーブB細胞	0.5-5	単球系樹状細胞	0.2-0.4
樹状細胞	0.5-1	メモリーB細胞	0.4-2	形質細胞様樹状細胞	0.1-0.2
幹細胞	0.01-0.05	NKT細胞	0.01-0.5	自然リンパ球	0.01-0.1

マウスの細胞存在比率

脾臓		胸腺		末梢血		リンパ節
細胞タイプ	％	細胞タイプ	％	細胞タイプ	％	細胞タイプ	％
T細胞	21-35	CD4+	4-6	T細胞	17-20	T細胞	65-78
CD4+	13-20	CD8+	1-2	CD4+	8-12	CD4+	35-64
CD8+	7-15	CD4+/8+	85-95	CD8+	7-10	CD8+	19-30
γδ T細胞	0.5-1			B細胞	35-58	B細胞	9-15
B細胞	44-58			単球	2-3	Tregs	2-3
単球	3.5-5			好中球	4-6	樹状細胞	0.5-1
顆粒球	1-2			好酸球	1-2
NK細胞	1-5			NK細胞	4-7
iNKT細胞	1-2			iNKT細胞	0.2-0.5
ミエロイド様樹状細胞	0.5-2
リンパ球様樹状細胞	0.5-1
形質細胞様樹状細胞	0.1-0.3

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フローサイトメトリー前処理用試薬

バッファー

フローサイトメトリーやその他のアプリケーション用の細胞表面および細胞内抗体染色での使用に適したバッファーの範囲があります。

ロイコパーム

Leucoperm

細胞内染色用の細胞透過試薬

Leucoperm試薬を使用すると、細胞内抗原を表面抗原と同じように簡単に分析できます。細胞質または核酵素、腫瘍性タンパク質、サイトカイン、確立された膜分子の細胞質局在などの構造は、抗体で染色できます。 Leucopermを使用すると、細胞の形態を維持しながら、懸濁液中の細胞を固定して透過処理することができます。

Staining Buffer

ウシ胎児血清を含む染色バッファー

Staining Bufferは、生細胞と固定細胞の両方を抗体で染色する場合の使用に最適化されています。標識抗体と非標識抗体の両方での使用に適しており、抗体希釈培地および洗浄バッファーとして使用できます。ウシ子牛血清の添加により、標的細胞へのバックグラウンド染色が減少し、アジ化ナトリウムが含まれているため、受容体のキャッピングが最小限に抑えられます。

Leucoperm（BUF09）で透過処理したイヌ末梢血中の顆粒球をマウス抗イヌCD107b：RPE（MCA2558PE）で染色

Fixation Buffer

パラホルムアルデヒド含有固定バッファー

透過処理前の細胞内染色に必須の固定化バッファーは、ほとんどの細胞タイプでの使用に適したパラホルムアルデヒドベースの固定液です。

ICS Perm Wash Buffer (10x)

細胞内染色用の透過処理および洗浄バッファー

サイトカインや細胞質タンパク質などの細胞内ターゲットにアクセスするには、固定後の細胞膜の透過処理が必要です。 ICS Perm Wash Bufferは細胞形態への影響が最小限であり、水で希釈するための10倍溶液として供給されます。 また、細胞内染色中に洗浄バッファーとして使用して、バックグラウンド染色を最小限に抑えることができます。

Erythrolyse Red Blood Cell Lysing Buffer

赤血球溶解バッファー

バイオ・ラッドのErythrolyse Red Blood Cell Lysing Bufferは全血免疫蛍光染色法で使 用するように設計されており、ヒト、マウスおよびラットの血液での使用に適しています。 標準的な手順に従って染色した後、2 mlの希釈したERYTHROLYSEを100 μlの全血に添加し、よく混合し、室温で10分間インキュベートします。次いで、チューブを遠心分離し（400g、5分）、上清をデカントし、細胞を2 ml PBS / 1％BSAで1回洗浄した後、フローサイトメトリーで分析して使用します。本製品は室温で1年間安定です。

FC ブロック用試薬

Fc受容体は、単球、マクロファージ、樹状細胞、B細胞に見られます。 名前が示唆するように、それらは抗原特異的Fabドメインではなく定常Fcドメインを介して抗体に結合します。 これにより、誤検出が発生する可能性があります。 このタイプの結合を防ぐために、抗原特異的結合のみが確実に観察されるようにするブロッキング剤が開発されました。

(a)未処理サンプル、(b)Human SeroBlock（BUF070A）で処理したサンプルにおけるFITC標識マウス抗ヒトCD11a（MCA1848F）またはマウスIgG2aネガティブコントロール：FITC赤（MCA929F）によるTHP-1細胞の染色。

Mouse Seroblock FcR

マウス Seroblock FcR は、それぞれ FcR γ III および FcR γ：II としても知られているマウス CD16 および CD32 細胞表面タンパク質を認識するラット抗体です。CD16 および CD32 は、単球、マクロファージ、B リンパ球、顆粒球、NK 細胞、樹状細胞およびいくつかの活性化 T リンパ球などを含む広範囲の細胞に発現しており、抗体の非特異的結合が生じ、「高いバックグラウンド」染色の原因となります。 マウスサンプルを使用する場合に本試薬によりプレインキュベーションを行うことにより、抗体の非特異的結合をブロックし、バックグランドを下げることができます。

Human Seroblock

ヒト Fc 受容体は、単球、マクロファージ、B 細胞、顆粒球および樹状細胞を含む様々な免疫細胞で発現しています。Fc 受容体を発現する細胞は、Ig の Fc 受容体結合に起因して、偽陽 性の免疫蛍光染色されることがあります。Human SeroBlockは、適切な抗体染色を妨害することなく、非特異的染色を防止することができます。本試薬は、ヒトサンプルの使用時に効果的です。

Ordering Information

カタログ番号	品名	用途
Leucoperm – 細胞内染色用の細胞透過試薬
BUF09	Leucoperm (50 Tests)	F
BUF09B	Leucoperm (250 Tests)	F
BUF09C	Leucoperm (1000 Tests)	F
Staining Buffer – ウシ胎児血清を含む染色バッファー
BUF073	Staining Buffer (500 ml)	F
Fixation Buffer - パラホルムアルデヒド含有固定バッファー
BUF071	Fixation Buffer (100 ml)
ICS Perm Wash Buffer (10x) – 細胞内染色用の透過処理および洗浄バッファー
BUF072	ICS Perm Wash Buffer (10x) (100 ml)	F
Erythrolyse Red Blood Cell Lysing Buffer - 赤血球溶解バッファー
BUF04B	Erythrolyse Red Blood Cell Lysing Buffe (100 Test/20 ml)	F
BUF04C	Erythrolyse Red Blood Cell Lysing Buffe (500 Test/100 ml)	F
FC ブロック用試薬
BUF041A	Mouse Seroblock FcR (0.1 mg)	F
BUF041B	Mouse Seroblock FcR (0.5 mg)	F
BUF070A	Human Seroblock (50 Test)	F
BUF070B	Human Seroblock (200 Test)	F

活性化試薬 (Activation Reagents)

タンパク質輸送阻害剤の有無にかかわらず、最適化された濃度のホルボール12-ミリスチン酸-13-アセテート（PMA）とイオノマイシンを含む2つの細胞活性化試薬を提供します。これらは目的の細胞の活性化に使用できます。

Cell Stimulation Reagent (without Brefeldin A)

細胞刺激試薬（ブレフェルディンAなし）

タンパク質輸送阻害剤を含まない、DMSO中のPMAとイオノマイシンの最適化された混合物で、細胞の活性化とサイトカイン分泌の刺激に適しています。 DMSOでは500xソリューションとして利用できます。 細胞内サイトカイン染色については、ブレフェルディンAまたはモネンシンのいずれかを追加するか、ブレフェルディンAと一緒にCell Stimulation Reagentを使用して、細胞にサイトカインを蓄積させることをお勧めします。

Cell Stimulation Reagent (with Brefeldin A)

細胞刺激試薬（ブレフェルディンA含有）

タンパク質輸送阻害剤ブレフェルディンAを含むDMSO中のPMAとイオノマイシンの最適化された混合物で、細胞の活性化とサイトカイン産生の増加に適しています。 ブレフェルディンAは、サイトカインが細胞内に蓄積することを可能にし、細胞内蛍光染色による検出を可能にします。

タンパク質輸送阻害剤（Protein Transport Inhibitors)

細胞内サイトカイン染色を増強するために使用できる2つのタンパク質輸送阻害剤を提供しています。 サイトカインとケモカインは通常分泌されるため、これらの阻害剤を使用すると、細胞内にタンパク質がトラップされ、ゴルジ体と小胞体にサイトカインが蓄積します。 これらの阻害剤の選択と培養条件は、染色する種とサイトカインに応じて最適化する必要があります。

Brefeldin A (ブレフェルディンA)

この阻害剤は、ゴルジ体から小胞体へタンパク質を再分配することにより作用します。 DMSOでは1000xソリューションとして利用できます。

Ordering Information

カタログ番号	品名	用途
細胞刺激試薬
BUF076A	Cell Stimulation Reagent Without Brefeldin A(500x) 0.1 ml	F
BUF077A	Cell Stimulation Reagent With Brefeldin A (500x) 0.1 ml	F
タンパク質輸送阻害剤（Protein Transport Inhibitors)
BUF074	Monensin Solution (1000X) 1 ml	F
BUF075	Brefeldin A Solution (1000X) 1 ml	F

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フローサイトメトリーで使用できるキット (The Kits for Flow Cytometry)

分野	分類	製品	用途
細胞生物学 (Cell Heath)	細胞生存率 (Cell Viability)	ReadiDrop PI/7-AAD Cell Viability Assay	F
		VivaFix Cell Viability Assay	F / IF
	細胞増殖 (Cell Proliferation)	CFDA-SE ASSAY	F
		CytoTrack Cell Proliferation Assay	F
細胞死 （RCD : Regulated Cell Death)	アポトーシス (Apoptosis)	Annexin V Kit	F
		FLICA Caspase Kit	F / IF
		Mitochondrial Permeability Transition (MitoPT) Kits [JC-1]	F / IF
		Mitochondria Membrane Potential (MitoPT) Kits [TMRE/TMRM]	F / IF
		FLISP Serine Protease Assay Kit	F / IF
	オートファジー (Autophagy)	Autophagy Assay Red Detection Kit	F
		Cathepsin B/K/L Kits [Green/Red]	F / IF
	パイロトーシス (Pyroptosis)	Pyroptosis FAM/660 Caspase-1 Kit	F / IF
その他	抗体標識	ReadiLink Antibody Labeling Kits	F / IF
		LYNX Rapid & Rapid Plus Conjugation Kits	F / IF / E / WB / C / P

C	Immunostaining (Frozen Sections)	E	ELISA	EM	Electron Microscopy	F	Flow Cytometry
FN	Functional Assay	IC	Immunocytochemistry	IF	Immunofluorescence	IP	Immunoprecipitation
P	Immunostaining (Paraffin Sections)	WB	Western Blotting

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リーディーリンク

ReadiLink Antibody Labeling Kit

製品特長

• 精製用カラムを不要として時間を節約します
• 実操作時間は10分未満（反応時間を除く）
• 簡単な２ステップで抗体に蛍光を標識できます
• 抗体以外の必要試薬はすべてキットに含まれています
• 蛍光多色実験に対応するように抗体に10種類の異なる蛍光物質をラインアップ

製品詳細はこちら

Ordering Information

カタログ番号	品名	同等の 蛍光物質	励起波長 (nm)	蛍光波長 (nm)
1351011	ReadiLink 405/454	Pacific Blue	403	454
1351002	ReadiLink 492/516	FITC Alexa 488 DyLight 488	492	516
1351003	ReadiLink 555/570	Cy3 Alexa 555 DyLight 550	555	570
1351004	ReadiLink 594/610	Texas Red Alexa 594 DyLight 594	594	610
1351005	ReadiLink 633/655	Cy5 Alexa 633 DyLight 633	633	655
1351006	ReadiLink 647/674	Cy5 Alexa 647 DyLight 650	647	674
1351007	ReadiLink 680/701	Cy5.5 IRDye 700 DyLight 680	680	701
1351008	ReadiLink 700/713	Alexa 700	700	713
1351009	ReadiLink 750/780	Alexa 750 DyLight 755	750	780
1351010	ReadiLink 790/811	IRDye 800 Alexa 790 DyLight 800	790	811

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フローサイトメトリー用ツール (Supporting Tools for Flow Cytometry)

プロフロー　セルフィルター

ProFlow Cell Filter

フローサイトメトリー用のセルフィルター（セルストレーナー）です。5 ml FACSチューブに取り付けてサンプルをフィルターすることで、デブリスや凝集細胞を除去します。

• 標準の5 mlフローサイトメトリーチューブに対応
• 単層メンブレンにより、サイズごとの正確なろ過が可能
• 簡単な２ステップで抗体に蛍光を標識できます
• 側面にフィルターメンブレンのない円錐形の漏斗により、空気を遮断しないため、サンプルの流れとろ過を高速化

30 μm

50 μm

70 μm

Ordering Information

カタログ番号	品名
12012577	ProFlow Cell Filter 30 μm 非滅菌 (100)
12012582	ProFlow Cell Filter 50 μm 非滅菌 (100)
12012575	ProFlow Cell Filter 70 μm 非滅菌 (100)
12012576	ProFlow Cell Filter 30 μm 滅菌 (100)
12012574	ProFlow Cell Filter 50 μm 滅菌 (100)
12012573	ProFlow Cell Filter 70 μm 滅菌 (100)

バイオ・ラッドではフローサイトメトリー実験を行う上で、蛍光スペクトルビュアー(Fluorescent Spectraviewer)やCell Marker Toolなどの参考になるツールをご用意しています。 また、プロトコール集などはフローサイトメトリーのWebページもご参照ください。

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